小時候挑食讓爸媽操碎了心,長大後養了仔,報應總算轉到了我的頭上。
為了給我的鼠仔餵藥,灌胃,皮下、腹腔以及靜脈注射都試過了,然而,鼠仔的喜悲不互通,同一組的數據差異大的不能看。
- 為什麼同一組給藥組內數據差異這麼大?
- 該如何獲取想要的一致性數據?
- 給藥姿勢會直接影響到實驗結果嗎?
- 我的鼠仔怎麼才能健康成長?
- 如何科學地給小鼠餵藥?
想知道這些問題的答案?都在這一篇啦——
- 保定小鼠使小鼠身體盡量拉長,並且頭部頸部保持在一條直線上,方便灌胃針通過喉嚨進入食道。
- 灌胃針從小鼠口腔進入,一旦通過喉部將注射器和灌胃針豎起,灌胃針正確進入食道後,應該感到非常輕鬆地可以順食道向下插入,此時小鼠基本處於鼻尖向上垂直於地面的狀態。
- 灌胃針頂端的小球狀突起是防止餵管插入時造成損傷或進入氣管。一般小鼠的胃大約在胸骨末端劍狀軟骨處,可在灌胃前,先在體外估計進針的深度。
- 灌胃體積過大而超出小鼠胃可承受的限度(比如40 mL/kg 以上),會導致藥物直接進入小腸或發生食道返流。
- 灌胃時操作不當會導致液體進入肺部,或胃、食道破裂。灌胃前麻醉或鎮靜反而會增加小鼠誤吸(藥物進入肺部)的風險。
- 一旦發生小鼠嗆到或窒息,應立即停止給藥,取出灌胃針。如果情況嚴重,可以考慮安樂死。
- 將小鼠固定在手中。
- 用移液槍或註射器吸取少量藥物,滴在小鼠鼻孔處。
- 觀察到液滴被小鼠吸入。
- 反復如此操作,直至給完一定體積的藥物。
- 鼻內給藥通常用於將藥物或樣品引入肺部,這種方法相較氣管滴注法更為自然。由於鼻粘膜血管豐富,鼻內給藥的效果有時可以類似於靜脈注射。當然,大劑量給藥就不太合適了,容易導緻小鼠呼吸困難或溺水。
- 保定小鼠背部朝上,拇指與食指夾住小鼠頸背側皮膚。
- 注射針自小鼠頭部向尾部方向進入,插入被提起的頸背側皮膚形成的三角區。
- 針頭可輕輕向左右擺動,如果很容易擺動就表示進入皮下,再輕輕抽吸,觀察到沒有回血後即可緩慢地將藥物推入。
- 為防止藥物外漏,推入藥物後,可讓針頭在皮下停留幾秒鐘;拔針時,保定手的拇指與食指捏住進針部位片刻。
- 皮下注射的吸收比其他途徑(比如靜脈注射或腹腔注射)要慢。注射的藥物應該調至生理pH 且無刺激性。
- 將小鼠固定在手中,小鼠鼻尖朝向地面方向(使肝臟向地面方向,避免進針時插入肝臟)。
- 由下腹中線偏右(首選右側,因為右側沒有重要臟器)約1~2 mm 處進針,插入約3~5 mm。
- 回抽針栓觀察無回血或尿液後,輕輕注入藥物。
- 如果需要反復多次注射,則每次換邊注射。
- 腹腔注射的藥物溶劑應選擇無刺激性的,以免引起疼痛。
- 小鼠尾部3 條靜脈呈品字型分佈,一般採用左右兩側的靜脈。
小鼠尾部左右兩側靜脈位置示意圖 [2]
- 可將小鼠尾巴放在45~50 ℃溫水中浸泡幾分鐘,或用75%酒精棉球反复擦拭尾部,來消毒並使尾部血管擴張、軟化表皮角質。
- 注射時,拉直小鼠尾巴,左手拇指和食指捏住鼠尾兩側,由近尾端1/4處(約10~15 mm),針頭與靜脈呈15~20度角(小於30度)進針。進針時,針尖的斜面朝上。
- 開始注入藥物時速度要緩慢,觀察如果無阻力、無白色皮丘出現,說明藥物進入了血管,可正式推入藥物。
- 如果需要多次尾靜脈注射給藥,注射點應盡可能從尾端開始更換血管位置,按次序向尾根部前移。
- 拔出針頭後,用拇指按住注射部位輕壓1~2 分鐘,防止出血。
- 靜脈給藥能更快地吸收藥物。但容易誘發溶血、血栓或血管炎的物質不適合靜脈給藥。
給藥針頭不合適或藥物體積過大都會引起小鼠的不適、應激甚至死亡。
通常我們可以按以下表格中的推薦體積來進行給藥:
表1.小鼠的推薦給藥體積及針頭尺寸 [1-2]
* 0.005 mL/g 為1 分鐘內快速給藥體積,0.025 mL/g 為5-10 分鐘內慢速給藥體積。通常快速給藥速度不超過3 mL/min。
美國實驗動物學會AALAS 對小鼠給藥的最大體積是這樣建議的:
表2.小鼠的最大給藥體積及針頭尺寸 [3]
歐洲EFPIA 和ECVAM 對於不同實驗動物的給藥體積的建議是這樣的:
表3.不同實驗動物不同給藥方式的推薦給藥體積 [4]
括號外數字(左側)為推薦最優體積,括號內數字(右側)為最大體積。
除特殊藥物或實驗,通常藥物pH 值調至7.3~7.4 較為合適。對於小鼠來說,如果腹腔或尾靜脈注射大體積藥物,最好事先將藥品預熱至37 ℃ 左右,以免小鼠體溫過低。
【參考文獻】:
1、Machholz E, et al. Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats. J.Vis.Exp.(67),e2771 (2012).
2、Turner PV,et al. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. JAALAS. 50, 600-613 (2011).
3、DVMPTimothy Lawson. LAT Training Manual (Laboratory Animal Technician Training Manual).(2004)
4、Diehl KH A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J.Appl.Toxicol.21,15-23(2001).
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