用了這麼多年pipette,你用對了嗎?

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相信小伙伴們每天都在和pipette打交道,移液是實驗室中最常見不過的操作。但不論是從事科學研究的學術實驗室,還是測試實驗室,數據的生成很大程度上受到移液器性能以及使用者操作技術的影響。

當pipette數據出現問題時,我們總會懷疑pipette的性能,但是科學文獻表明,pipette技術對實驗的成敗也起到關鍵作用。忽視技術指導可能會造成時間上和金錢上的巨大損失。

Yamamoto 1測試了來自7個動物檢疫所的33名參與者進行pipette操作培訓前後的誤差對比。結果顯示,簡單的pipette操作培訓即可提高移液的準確性。

那麼,問題來了

良好的pipette技術應該包括哪些方面?

接下來,我們就從使用最常見的pipette的5 個步驟以及如何準確的實施這些步驟來說明。

最佳量程選擇與量程設定

① pipette範圍選擇在滿量程的35% 到100% 時,可以保證最佳的準確性和重複性。選擇合適的量程可以提高1% 移液精度!盡量避免將移液器量程設置為最大值的10% 以下。

② 設定齒輪控制的pipette量程時,始終保持「下調」到所需量程,當由小量程調節到大量程時,旋轉調節旋鈕到達超過所需量程1/3 圈處,然後回調到所需量程準確位置,這樣能夠減少機械回衝或者齒輪滑動帶來的影響。

浸入的深度和角度

① 將吸頭浸入合適的深度可以提高5% 的準確性。吸頭浸入太深會導致吸液偏多,相反,浸入太淺,會吸入空氣。

各種型號規格的pipette推薦的吸頭浸入深度如下所示:

規格
浸入深度
2~10 μL
1~2 mm
20~200 μL
2~3 mm
200~2,000 μL
3~6 mm
2,000 μL 以上
6~10 mm

② 手持pipette的角度也會影響準確性。保證吸液或排液時偏離垂直不超過20°,可以提高2.5% 的準確性。

潤洗

潤洗是一種快速,簡單的提升移液準確性高達0.2% 的方法。為什麼呢?因為液體可能會在吸頭內壁上殘留形成液體薄膜,這樣所得的錯誤值將小於理論值。想要獲得更好的移液精度,可以在安裝新吸頭後, 用相同樣品對吸頭進行2~3 次潤洗,這樣薄膜會保持相當的恆定,從而提高移液的準確性和重複性。

吸液

保證吸液的一致性可以提高5% 的準確性。移取不同樣品時,使用一致的節奏,按壓或釋放按鈕的速度平穩一致,到達第一停止點的用力應保持一致。快速或不平穩的吸液會使液體噴濺、產生氣霧、套柄污染以及樣品量損失。

分液

良好的分液技巧也能提高1%的準確性。分液時用吸頭接觸容器壁時可以獲得更好的一致性。將吸頭的孔口端沿著容器壁向上滑動可以去除孔口端殘留的液體。另外兩種技巧同樣非常適用於水溶(非粘性)液。

文章來源:梅特勒
圖片來源:梅特勒
題圖來源:站酷海洛
Image by fernando zhiminaicela from Pixabay

生物學霸

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生物學霸

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