腫瘤免疫研究太難做?一張片子就搞定

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當下腫瘤免疫研究風生水起,各大藥廠爭相研發的熱門藥物靶點PD1/PD-L1 就是基於該領域的研究。但是,在腫瘤免疫研究中,我們往往需要檢測多個指標,樣本又非常珍貴,

如何實現在同一張切片上同時檢測多個指標?

如何能夠減少稀有細胞信息的丟失?

如何呈現不同指標的空間位置關係?

組織多色免疫螢光技術可以有效地幫大家解決臨床科研中所碰到的這些問題。

組織多色免疫螢光(mIHC)是一套基於酪酰胺信號放大技術(TSA,TyramideSignal Amplification)的多標記免疫組化染色方案,為組織樣品特別是石蠟組織樣品進行染色,並且允許同一樣本中使用同一種屬來源的不同一抗進行多標記複合染色。配合多光譜成像分析系統,可以獲得高信噪比的圖像,甚至是多達6種標記的同步染色和共定位及定量分析,滿足組織微環境中復雜表型分析的需求。
實驗原理
1、光素耦合的TSA在HRP和過氧化氫的作用下被活化,跟臨近蛋白的氨基酸殘基共價偶聯,使得蛋白樣品與螢光素穩定結合[1]

(圖片引自參考文獻[1] 

2、經過微波處理,前一輪非共價結合的抗體被洗掉,共價結合的熒光素還留存在樣品上。再換個一抗來第二輪孵育,周而復始。等到所有抗體孵育結束,光素都結合好後,最後檢測結果。由於每次體系中都只有單一抗體孵育,因此無需擔心抗體交叉反應,以及多指標一抗種屬匹配問題,解除了實驗設計時不同種屬抗體選擇匹配的限制[4]

(圖片引自參考文獻[4]

實驗步驟
選定待測組織、待測指標→ 組化驗證、單色驗證 → 多色光標記 → 各通道圖像採集 → 數據分析(細胞類型、表達強度定量分析) → 實驗結果
優勢
  • 光法多重免疫組化,可同時進行七個顏色通道以上,同一張組織切片上實現多達6 種染色,擺脫一抗種屬來源束縛,實現抗體自由選擇;
  • 組織原位類流式分析,單一細胞多重表達標記實現組織原位觀察,增強抗體靈敏度;
  • 易於設計和優化,實現超多通道同時檢測,全景展示蛋白表達特徵、節約樣品等。
近年,應用該技術發表了許多高分的文章例如:
2017年在Nature communications上詹姆斯·艾利森(James P Alison)發表的關於胰腺癌的研究結果[2]
2019年在nature medicine發表文章中使用多色免疫熒光檢測非小細胞肺癌中siglecl-15和CD68的共表達[3]
2019年the Journal Immunology文章報導一種由PD-1、PD-L1、OX40、CD27、TIM3、CD3、腫瘤標誌物和DAPI組成的八色複合免疫組化板的開發、優化和應用[4]
芯超生物
現推出多色光實驗服務,幫助您深入解析腫瘤微環境中的蛋白或細胞的異質性分佈,及其空間定位以及與組織結構的相互關係,理解各組分在組織微環境中的角色和作用。芯超生物自推出免疫光以來,受廣大科研人員信賴。與常規免疫組化相比,光法多重免疫組化,可同時進行七個顏色通道,同一張組織切片上實現多達6個指標的染色(DAPI)

(芯超生物實驗平台多色圖)

參考文獻:
[1] 錢幫國,焦磊. 多標記免疫螢光染色及多光譜成像技術在組織學研究中的應用. 中國組織化學與細胞化學雜2017; Vol.26.No.4.

[2] Carstens JL, Correa de Sampaio P, Yang D, Barua S, Wang H, Rao A, Allison JP, LeBleu VS and Kalluri R. Spatial computation of intratumoral T cells correlates with survival of patients with pancreatic cancer. Nat Commun 2017 ; 8: 15095.

[3] Wang J, Sun J, Liu LN, Flies DB, Nie X, Toki M, Zhang J, Song C, Zarr M, Zhou X, Han X, Archer KA, O’Neill T, Herbst RS, Boto AN, Sanmamed MF, Langermann S, Rimm DL and Chen L. Siglec-15 as an immune suppressor and potential target for normalization cancer immunotherapy. Nat Med 2019;

[4] Gorris MAJ, Halilovic A, Rabold K, van Duffelen A, Wickramasinghe IN, Verweij D, Wortel IMN, Textor JC, de Vries IJM and Figdor CG. Eight-Color Multiplex Immunohistochemistry for Simultaneous Detection of Multiple Immune Checkpoint Molecules within the Tumor Microenvironment. J Immunol 2018; 200: 347-354.

題圖來源:站酷海洛
圖片來源:芯超、文中參考文獻
文章來源:芯超
該圖片由Darko StojanovicPixabay上發布

 

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生物學霸

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