養細胞是醫學研究生的基本功，每位初學者大多都會有以下三個疑惑：

1、養細胞時要不要燒瓶口？不燒的話污染了怎辦？

不要燒瓶口！

大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。

不知道大家是不是有培養基怎麼越用越發紫的困惑？

知道為什麼嗎？

燒瓶口燒的！

培養基一般都是用碳酸/碳酸氫根作緩衝體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱後，空氣變冷，壓力驟降，培養基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。

培養基中的碳酸少了，當然會變鹼。如果不燒瓶口的話，你會發現培養液變鹼的速度會大大減慢。當然多多少少還是會有一點越用越鹼，因為室溫還是比冰箱內的溫度高。

如果大家習慣了燒瓶口，也未嘗不可。

只是培養液變鹼了怎麼辦呢？

有些人用稀鹽酸或醋酸重新調pH值。這樣做是不對的。因為雖然pH值暫時糾正了，但是培養基的緩衝能力也就沒多少了。加了這樣的培養液很快就會變黃。

正確的做法是把裝培養基的瓶口擰鬆，放到二氧化碳培養箱中，過夜。讓培養箱中的二氧化碳進入培養基。pH值就可以糾正回來。

如果不想這麼做，也可以在培養基中加Hepes。

Hepes 不會揮發，隨你怎麼燒瓶口，培養液的顏色都不會變。

如果嫌加Hepes麻煩，把培養基分裝到小瓶中也是個辦法。讓培養基開幾次瓶就用完。

也可以用培養皿養細胞。培養皿的開口比培養瓶大，二氧化碳容易進入。

即使加的培養基很紫，放入培養箱後一會兒就能糾正成櫻桃紅。

如果還是堅持用培養瓶，瓶口一定要擰得很鬆，要那種再擰一圈就要掉下來才行。

2.隔多久看一次我的細胞？為啥我一天到晚都在看，細胞老是長不好？

不要頻繁看細胞！

對於初學者而言，養細胞就像養孩子一樣，有空就要去看看。

細胞越是養不好，就越是經常去看。

實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選後，密度特別低的細胞。

培養基中的生長因子是非常有限的！

細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利於生長的局部環境。

你跑去看細胞，培養瓶這麼一晃，把因子都給晃散了！

3. 什麼時候中止消化？

不要怕消化。

在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。

細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。

其實，用力吹打對細胞的損傷比消化更大！

實驗室大師兄在做血管平滑肌原代的時候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞完全變圓後再中止消化，細胞輕輕一晃就能下來。

還有，動作要輕柔，盡量不要產生氣泡！氣泡在破裂時的機械應力相當大，對細胞的傷害也是很大的！

照片由 Chokniti Khongchum 從 Pexels